Trypanosoma cruzi XRNA granules colocalise with distinct mRNP granules at the nuclear periphery

BACKGROUND Eukaryotic ribonucleoprotein (RNP) granules are important for the regulation of RNA fate. RNP granules exist in trypanosomatids; however, their roles in controlling gene expression are still not understood. XRNA is a component of granules in Trypanosoma brucei but has not been investigated in Trypanosoma cruzi. OBJECTIVES This study aimed to investigate the TcXRNA dynamic assembly and its interaction with RNP components under conditions that affect the mRNA availability. METHODS We used in vitro metacyclogenesis of T. cruzi to observe changes in RNP granules during the differentiation process. TcXRNA expression was analysed by Western blot and immunofluorescence. Colocalisation assays were performed to investigate the interaction of TcXRNA with other RNP components. FINDINGS TcXRNA is constantly present during metacyclogenesis and is localised in cytoplasmic granules. TcXRNA does not colocalise with TcDHH1 and TcCAF1 granules in the cytoplasm. However, TcXRNA granules colocalise with mRNP granules at the nuclear periphery when mRNA processing is inhibited. MAIN CONCLUSIONS TcXRNA plays a role in mRNA metabolism as a component of mRNP granules whose assembly is dependent on mRNA availability. TcXRNA granules colocalise with distinct RNP granules at the nuclear periphery, suggesting that the perinuclear region is a regulatory compartment in T. cruzi mRNA metabolism.

Regulação coordenada da síntese das proteínas do SSU processomo de Trypanosoma cruzi (Chagas, 1909): caracterização molecular de TcSof1 e controle da expressão gênica durante a metaciclogênese / Coordinate regulation of the synthesis of proteins of the SSU processomo of Trypanosoma cruzi (Chagas, 1909): molecular characterization of TcSof1 and control of the genic expression during metacyclogenesis

O protozoário Trypanosoma cruzi é o agente etiológico da Doença de Chagas que afeta milhares de pessoas anualmente na América Latina. As formas infectivas desse parasita, tripomastigotas metacíclicas, apresentam núcleo alongado, sem nucléolo evidente, queda drástica nas taxas de transcrição e tradução, diminuição das proteínas ribossomais e parada na fase do tipo G1do ciclo celular. O isolamento de genes com padrão de expressão estágio-específico demonstrou que um dos fragmentos selecionados apresentava forte similaridade com a proteína Sof1p, constituinte do complexo SSU processomo, envolvido no processamento do rRNA 18S em levedura. A seqüência completa do gene foi obtida, apresentando uma fase aberta de leitura de 1335 pb, que codifica uma proteína de 50 kDa que possui sete repetições do tipo WD, motivo de interação proteína-proteína e um domínio Sof sem função conhecida. A proteína recombinante foi expressa e purificada com a finalidade de obter-se anticorpo policlonal específico anti-TcSof1. Estudos de imuno-microscopia mostraram que a proteína estava distribuída em todo o núcleo do parasita, preferencialmente na periferia. Ensaios de RNA de interferência em Trypanosoma brucei, revelaram que o silenciamento do gene ortólogo, tbsof1, leva a uma diminuição da proliferação celular, mas não está relacionada ao ciclo celular, tal como ocorre em levedura.Através de análises da expressão do gene TcSof1, observamos sua presença ao longo da metaciclogênese, porém a proteína não foi detectada nas formas tripomastigotas metacíclicas, corroborando com os dados da proteína TcImp4, considerada também específica desse complexo de processamento (Fragoso e cols, 2003). Com intuito de verificar a existência de co-regulação entre as sete proteínas consideradas específicas do complexo SSU processomo em T.cruzi (Sof1p, Imp4p, Imp3p, Dhr1p, Mpp10p, Lcp5p e Rrp9p), recorremos à técnica de PCR quantitativo. Verificamos que a maioria dos genes é regulada pós-transcricionalmente...